Ciências Biomédicas

Relação funcional entre a proteína Bub3 do checkpoint mitótico e a proteína motora dineína na ligação cinetocoro-microtúbulos

Sat, 01 Jan 2011 00:00:00 GMT

Relação funcional entre a proteína Bub3 do checkpoint mitótico e a proteína motora dineína na ligação cinetocoro-microtúbulos Silva, Patrícia Manuela Areias da O checkpoint mitótico assegura a fidelidade da segregação cromossómica a cada divisão celular. Este mecanismo de controlo inibe a anafase até que todos os cromossomas estabeleçam uma ligação bipolar, através dos seus cinetocoros irmãos, com os microtúbulos provenientes de pólos opostos do fuso mitótico, culminando no seu alinhamento na placa metafásica, fenómeno designado de congressão. Algumas das proteínas do checkpoint mitótico, designadamente Bub1, BubR1 e Bub3, para além da sua função na via de sinalização do checkpoint, foram envolvidas na regulação da ligação cinetocoro-microtúbulos. No entanto, fica por esclarecer se esta função é directa ou implica uma relação com as proteínas que medeiam a ligação dos cromossomas aos microtúbulos, nomeadamente com as proteínas motoras dineína e CENP-E. Foi reportada, por sistema two-hybrid, uma interacção entre as proteínas Bub3 e dineína. Assim, propusemo-nos a caracterizar, por RNA de interferência em células humanas em cultura, a relação funcional entre as proteínas Bub3 e dineína na ligação cinetocoro-microtúbulos e na congressão. Os resultados mostram que a depleção, quer da Bub3 quer da dineína, originou placas metafásicas incompletas com vários cromossomas desalinhados, confirmando a importância destas proteínas na congressão. Contudo, a depleção simultânea das duas proteínas resultou na restauração de uma fracção significativa de placas metafásicas com todos os cromossomas alinhados. É sugerida uma relação antagonística entre as proteínas Bub3 e dineína na regulação da ligação cinetocoro-microtúbulos.

Molecular assessment of x-linked intelectual disability: a gene cluster based approach

Sat, 01 Jan 2011 00:00:00 GMT

Molecular assessment of x-linked intelectual disability: a gene cluster based approach Oliveira, Bárbara André de Sousa O défice intelectual representa uma forma de deficiência cognitiva, responsável por limitações a nível mental e dos comportamentos adaptativos e sociais. Quando associado ao cromossoma X constitui uma causa frequente de atraso mental monogénico que afecta sobretudo indivíduos do sexo masculino. As mutações nos genes FMR1, AFF2 e ARX surgem como as principais causas genéticas. Os genes FMR1 e AFF2 contêm regiões repetitivas polimórficas sujeitas a mutações dinâmicas que podem originar expansões patogénicas. No gene ARX o segundo exão representa um hotspot mutacional, visto conter regiões repetitivas que codificam alaninas, sendo a mutação c.429_452dup24 a mais frequente. Com o objectivo de caracterizar uma população de risco, foi efectuado um rastreio molecular por PCR multiplex dos hotspot mutacionais dos genes FMR1, AFF2 e ARX em amostras de indivíduos com défice intelectual e numa população controlo. Para avaliar o número e o padrão de interrupções [AGG] da região repetitiva do gene FMR1 foi optimizada a técnica de Triplet-primed PCR, permitindo estudar a sua estabilidade. As variações de tamanho detectadas no exão dois do gene ARX foram caracterizadas por sequenciação. As frequências alélicas dos genes FMR1 e AFF2 na população portuguesa são semelhantes a outras populações Caucasianas. Este trabalho demonstra que a variação do número de tripletos no gene FMR1 não está relacionado com variações no número de tripletos do gene AFF2 (Pearson’s R: ρ >0,05), apesar de, a combinação dos alelos com trinta tripletos (no gene FMR1) e com catorze (no gene AFF2) ser a mais frequente (13,4%) (X2: ρ<0,05). Os alelos FMR1 com a primeira interrupção [AGG] após nove ou dez tripletos [CGG] demonstraram ter origens diferentes (X2: ρ <0,05; Pearson’s R: ρ <0,05). Foi observada uma forte correlação entre os alelos de vinte e nove tripletos e o haplótipo SNP CTC, bem como entre os alelos com trinta repetições e a linhagem TTT (X2: ρ <0,05). Do rastreio do gene ARX resultou a identificação da mutação c.429_452dup24 em três indivíduos pertencentes a duas famílias distintas e da variante polimórfica c.441_464del24 em três amostras distintas. Também foram detectadas pequenas inserções, in-frame, que codificam para alaninas (c.304GCG[11] e c.304GCG[13]), com consequências patogénicas ainda por determinar. É evidente a importância do estudo das interrupções [AGG] e do respectivo background genético dos alelos FMR1 para um diagnóstico clínico exacto. As mutações no gene ARX de patogenicidade conhecida, apesar de pouco frequentes, revelam que este gene deve ser tido em conta no rastreio genético do défice intelectual.

Variabilidade genética das glicoproteínas GPlba, GPllla, GPLa e do P2RY12 - associação com a funcionalidade plaquetária medida pelo PFA-100

Sat, 01 Jan 2011 00:00:00 GMT

Variabilidade genética das glicoproteínas GPlba, GPllla, GPLa e do P2RY12 - associação com a funcionalidade plaquetária medida pelo PFA-100 Salgado, Paula Raquel da Costa A activação plaquetária resulta da interacção entre agonistas activadores da função plaquetária e receptores específicos para esses agonistas. A expressão dos receptores na membrana das plaquetas está sobre controlo genético e acredita-se que variações nas sequências genéticas dos receptores contribuem para diferentes graus de activação plaquetária. Segundo a Organização Mundial de Saúde, as doenças cardiovasculares estão no topo das doenças que mais mortalidade e morbilidade causam. Dado a importância desta estatística, o presente trabalho assume grande relevância. Assim sendo, o objectivo principal deste estudo é verificar o impacto de oito polimorfismos nas principais proteínas plaquetárias (HPA-2, Kozak e VNTR na GPIα, PLA1/A2 na GPIIIa, o C800T na GPIa e três SNP´s no receptor P2Y12) sobre a funcionalidade plaquetária, avaliada através do sistema PFA-100®. Os oito polimorfismos estudados encontram-se dentro do equilíbrio de Hardy-weinberg e não diferiam significativamente dos resultados obtidos noutras populações caucasianas já previamente estudadas. Os polimorfismos em conjunto influenciam-se mutuamente e condicionam os resultados do PFA-100. Contudo, os polimorfismos PlA1/A2 da GPIIIa, o VNTR estudado na GPIbα e o polimorfismo C807T localizado na GPIa, parecem ser aqueles que mais contribuem para as diferenças individuais na reactividade plaquetária. Em conclusão, poderá dizer-se que os nossos resultados evidenciam a importância de estudos de polimorfismos plaquetários na avaliação da reactividade plaquetária o que poderá contribuir para o estabelecimento de um perfil genético de funcionalidade das plaquetas, importante tanto na prevenção de eventos trombóticos como na adequação individual à terapia antiplaquetária.

Tracking the heart progenitor/stem cell niche(s) at steady-state vs. myocardial-infarction

Sat, 01 Jan 2011 00:00:00 GMT

Tracking the heart progenitor/stem cell niche(s) at steady-state vs. myocardial-infarction Valente, Mariana Esteves da Silva Following ischemic injury, the myocardium undergoes extensive cardiomyocyte loss, scar formation and ventricular remodeling, which can eventually lead to heart failure, a major cause of morbidity and mortality worldwide. Implementation of myocardial infarction experimental models is critical to dissect the pathophysiological mechanisms of left ventricle remodeling and progressive heart failure. Moreover, these models are tools for the identification and validation of novel pharmacological-, and cellular-based cardiovascular therapies, whose ultimate goal is to prevent and/or revert this devastating condition. In the herein work an experimental mouse model of myocardial infarction implemented in our laboratory, by permanent ligation of left anterior descending coronary artery, was validated through histological and functional assessment. Since the identification of the adult myocardium Sca-1pos, c-Kitpos and/or MDR1pos progenitor/stem-like cells (CPCs), the heart started to be viewed as an organ endowed with self-renewing potential. However, it remains unclear whether and how such cells contribute to cardiac tissue turnover throughout life; there is also an urgent need to clarify the role of the putative adult CPCs under pathological conditions. Therefore, exploratory work was performed to establish solid tools which will allow future detailed studies on the role of cardiovascular progenitor cells in physiological vs. injury scenarios. This will ultimately contribute to the development of novel therapeutic approaches for cardiac regeneration.