| dc.description.abstract | O uso terapêutico de Small Interfering RNA (siRNA) tem sido observado como uma
potencial nova abordagem para o tratamento do cancro. O desafio-chave no campo
clínico consiste na entrega de siRNA no citosol das células-alvo. Assim, vários
sistemas de entrega de siRNA, tais como lipossomas, polímeros e partículas
inorgânicas, têm sido desenvolvidos de forma a melhorar a eficácia terapêutica do
siRNA.
O nosso principal objectivo neste projeto, que deu origem a esta dissertação, foi
desenvolver novos protocolos, bem como optimizar outros já existentes, para o uso
na produção/síntese de conjugados de quitosano/cetuximab, de forma a utilizar
estes últimos para encapsular siRNA e direccioná-los para as células que
sobreexpressam EGFR.
Diversos desafios foram apresentados ao longo deste processo, assim, várias foram
as tentativas de produzir um conjugado viável e em concentração razoável, em
diferentes proporções molares de cetuximab para quitosano. Não foram apenas os
tempos de reacção uma preocupação, mas também e principalmente as
concentrações dos compostos e a adição ou remoção de diferentes passos do
processo foram tidos em conta. No final, um novo protocolo foi proposto.
Após o desenvolvimento e optimização do novo protocolo de conjugação, a segunda
linha de objectivos consistiu na análise de conjugados através de FTIR de forma a
confirmar a presença de um verdadeiro novo conjugado no produto final.
A quantificação proteica foi, de igual forma, determinada em pré- e pós- filtração dos
produtos, uma vez que nos iria dizer, por exclusão, que se os produtos préultrafiltrados
possuíssem algum material proteico que pudesse ser, estaria
conjugado com o LMWChi, uma vez que se estivesse livre teria passado a
membrana de filtração (membrana de 150000 MW)
Finalmente, a última linha de trabalhos deste projeto consistiu no teste em células
dos conjugados produzidos, recorrendo aos ensaios com MTT e LDH com o objetivo
de avaliar os seus efeitos citotóxicos.
Um par dos conjugados produzidos com sucesso poderão ser utilizados no futuro
para encapsular siRNA, produzir nanopartículas e melhorar a eficácia terapêutica do
siRNA como terapia direccionada contra o cancro do pulmão das células não
XVII
pequenas, ainda assim considerando que muito trabalho haverá a fazer ao nível da
eficiência de encapsulação do conjugado | pt_PT |
