Interleukin-15 and phytohaemagglutinin: a combination to study human CD8+T cell differentiation in vitro
Abstract
Estudos prévios realizados no nosso laboratório avaliando a influência da IL-15
na expansão e diferenciação antigénio-independente de células humanas T CD8+,
demonstraram que esta citocina é capaz de induzir a expressão de novo de recetores
natural killer (NKR) em linfócitos T CD8+CD56- purificados, após 12 dias de cultura.
Células T CD8+ NK-like induzidas pela IL-15 apresentavam um fenótipo regulatório
(efetor/memória) e a expressão aumentada de NKR estava intrinsecamente relacionada
com aquisição de CD56.
O principal objetivo deste trabalho foi estabelecer condições de cultura ideais de
modo a manter culturas de longo prazo de linfócitos T CD8+ e estudar caraterísticas
fenotípicas destas células T CD8+ diferenciadas.
Para esse fim, linfócitos T CD8+ foram isolados a partir de PBMC de dadores de
sangue saudáveis por purificação magnética, e cultivados na presença contínua de IL-15
em combinação com estímulos via TCR através do mitogénio específico para células T,
fitohemaglutinina (PHA). A expressão do marcador prototípico de NK, CD56, foi
avaliada por citometria de fluxo semanalmente, em combinação com parâmetros de
crescimento celular e sobrevivência.
Através da combinação de IL-15 e PHA conseguimos manter em cultura
linfócitos T CD8+ por longos períodos de tempo (até 90 dias). Durante este período, as
células T CD8+ adquiriram morfologia grande e granular, e uma fração destas células,
sobretudo blastos, expressaram o marcador prototípico de células NKT, CD56.
Particularmente, o estabelecimento de culturas a longo prazo de células T CD8+
diferenciadas só foi possível quando a IL-15 foi combinada cada duas semanas com o
estímulo da PHA.
Estes resultados sugerem o estabelecimento de linfócitos T CD8+ altamente
diferenciados em resultado da combinação de sinais TCR-dependentes e TCRindependentes.