On-line SPE for quantification of alprenolol and propranolol in human plasma sample

Abstract

O uso de substâncias dopantes representa uma grande preocupação quer a nível de fair play ou até mesmo sobre os riscos que estas substâncias representam para a saúde dos atletas. O doping é uma área de conhecimento público e de debate médico e legal, tendo sido relacionado com várias práticas desportivas. Como tal a definição de doping é entendida como a toma deliberada de substâncias ou o uso de métodos que potenciam o melhoramento da performance, e correlaciona esta intenção deliberada em melhorar a performance desportiva em detrimento da ética desportiva. Os bloqueadores beta constam da lista de substâncias proibidas pela Agência Mundial de Anti-Doping. Inicialmente desenvolvidas para serem utilizadas no controlo de arritmias cardíacas e com funções cardioprotectoras após enfartes de miocárdio, também tem a capacidade de causar efeitos de relaxamento, diminuindo a ansiedade, nervosismo e estabilizar o desempenho motor. O melhoramento do desempenho psicomotor pode ser benéfico em desportos que requerem coordenação, mãos firmes, precisão e exatidão como por exemplo tiro com arco, golfe, bilhar entre outros. Neste contexto é necessário desenvolver um método fácil e rápido para quantificar os bloqueadores beta em fluídos biológicos para controle de doping. O objetivo deste estudo foi estabelecer um método para quantificação de dois β-bloqueadores: alprenolol (ALP) e propranolol (PRP), em plasma humano usando o processo de extração em fase sólida (on-line) acoplado à cromatografia líquida de alta eficiência com deteção por fluorescência (on-line SPE-HPLC-FD). A preparação das amostras consistiu na centrifugação de 1 mL de todo o sangue durante 20 minutos a 10000 rpm. O volume de injeção foi 100 μL. As amostras foram injetadas diretamente numa coluna de material de acesso restrito (RAM) LichroCart 25-4 Lichrospher® RP-18 ADS (25 μm) com uma fase móvel constituída por água/acetonitrilo (com um fluxo de 2.0 mL/min) e em seguida, transferidas para uma coluna Luna PFP(2) (150 x 4.6 mm ID, 100 Å, 3 μm), em modo isocrático, com uma mistura de trietilamina 0.1% em água acidificada a pH=3.0 com ácido trifluoroacético e acetonitrilo como fase móvel. A separação dos bloqueadores beta foi realizada a 42ºC com um fluxo de 0.6 mL/min e foram monitorizados por fluorescência com um comprimento de onda de excitação de 280 nm e um comprimento de onda de emissão de 310 nm. O método demonstrou boa seletividade, linearidade (r2> 0.99) e precisão (0.1 <%RSD <11.1) no intervalo de concentrações de 30 ng/mL – 200 ng/mL. O limite de quantificação para ambos os bloqueadores beta foi 30 ng/mL nas amostras de plasma humano.