Pesquisa de antigénios alvo de cryptosporidium: produção de proteínas recombinantes e análise funcional

Abstract

Cryptosporidium é um parasita protozoário, intracelular predominantemente gastrointestinal, que infeta diversas espécies animais, incluindo o Homem. Muitas vezes é acompanhado pelo protozoário Giardia representando mais de 20% das infeções intestinais em crianças. Estas são normalmente autolimitadas, podendo evoluir para infeções crónicas. No entanto, vêm assumindo uma importância crescente em doentes imunocomprometidos. Estudos recentes, realizados em Portugal, indicam uma prevalência de 2,9% de giardíase em pacientes imunocompetentes, e uma prevalência de 4,1% e 2,3% de Criptosporidiose e giardíase, respetivamente, em pacientes imunodeprimidos. O tratamento em humanos faz-se recorrendo geralmente a macrólidos e antiprotozoários, mas que não têm demonstrado elevada eficácia. Sabe-se, hoje em dia, que este parasita pode ser transmitido através da ingestão de água, o principal vetor de transmissão ou através de alimentos contaminados. A transmissão oral-fecal tem também uma importância considerável neste processo. Os tratamentos convencionais realizados na água de consumo (rede distribuidora e ETAR), não apresentam total eficácia na viabilidade do parasita, aumentando assim o risco para a saúde pública. A publicação recente do genoma completo do Cryptosporidium parvum tem providenciado avanços significativos na compreensão dos mecanismos de invasão deste parasita e no desenvolvimento de alvos moleculares para a deteção e para a imunoterapia. Já se encontram identificadas várias espécies de Cryptosporidium, entre as quais C. hominis, C. parvum, C. meleagridis, C. felis, C. canis, C. suis e C. muris. Contudo as mais comuns em humanos são as infeções por C. parvum e C. hominis. Torna-se portanto essencial desenvolver atividades para caracterizar antigénios relevantes na invasão e infeção de células epiteliais do hospedeiro, e no imunodiagnóstico. O objetivo primordial deste projeto consiste na identificação e caracterização dos antigénios de Cryptosporidium essenciais no processo de infeção e invasão, e a produção de anticorpos que reconheçam estes antigénios, passo fundamental para um futuro controlo e tratamento destas infeções. Esta caracterização de antigénios-alvo ao nível molecular é essencial para melhorar testes de viabilidade e para a avaliação de abordagens imunoterapêuticas. Já se encontram identificadas as glicoproteínas de Cryptosporidium expressas durante o processo de invasão e infeção das células hospedeiras, tais como, CP12, GP900 ou TRAP-C1. Neste projeto, iremos focar-nos nas proteínas, Cryptosporidum parvum Cpa135 (CryptoSA35), implicada na fase de invasão do parasita, e Cryptosporidum parvum SA40 (CryptoSA40) presente na membrana interna da forma infetante de oocisto.