Interleukin-15 and phytohaemagglutinin: a combination to study human CD8+T cell differentiation in vitro

Abstract

Estudos prévios realizados no nosso laboratório avaliando a influência da IL-15

na expansão e diferenciação antigénio-independente de células humanas T CD8+,

demonstraram que esta citocina é capaz de induzir a expressão de novo de recetores

natural killer (NKR) em linfócitos T CD8+CD56- purificados, após 12 dias de cultura.

Células T CD8+ NK-like induzidas pela IL-15 apresentavam um fenótipo regulatório

(efetor/memória) e a expressão aumentada de NKR estava intrinsecamente relacionada

com aquisição de CD56.

O principal objetivo deste trabalho foi estabelecer condições de cultura ideais de

modo a manter culturas de longo prazo de linfócitos T CD8+ e estudar caraterísticas

fenotípicas destas células T CD8+ diferenciadas.

Para esse fim, linfócitos T CD8+ foram isolados a partir de PBMC de dadores de

sangue saudáveis por purificação magnética, e cultivados na presença contínua de IL-15

em combinação com estímulos via TCR através do mitogénio específico para células T,

fitohemaglutinina (PHA). A expressão do marcador prototípico de NK, CD56, foi

avaliada por citometria de fluxo semanalmente, em combinação com parâmetros de

crescimento celular e sobrevivência.

Através da combinação de IL-15 e PHA conseguimos manter em cultura

linfócitos T CD8+ por longos períodos de tempo (até 90 dias). Durante este período, as

células T CD8+ adquiriram morfologia grande e granular, e uma fração destas células,

sobretudo blastos, expressaram o marcador prototípico de células NKT, CD56.

Particularmente, o estabelecimento de culturas a longo prazo de células T CD8+

diferenciadas só foi possível quando a IL-15 foi combinada cada duas semanas com o

estímulo da PHA.

Estes resultados sugerem o estabelecimento de linfócitos T CD8+ altamente

diferenciados em resultado da combinação de sinais TCR-dependentes e TCRindependentes.